1、問(wèn)：做間接ELISA試劑盒法測(cè)試小鼠血清中的IgE抗體，設(shè)空白對(duì)照、和陰性對(duì)照、陽(yáng)性血清稀釋倍數(shù)為5千、1萬(wàn)、10萬(wàn)、20萬(wàn)不等，用的是生物素標(biāo)記的羊抗鼠IgE抗體，和親和素的辣根過(guò)氧化物酶?？墒墙Y(jié)果除了空白對(duì)照孔沒(méi)有顏色外，其余各孔全有顏色，而且OD值都相差不大，為什么?
回答：可能原因如下：
(1) 水質(zhì)被金屬離子等污染;防止辦法盡量使用新鮮水或蒸餾水。
(2) 洗滌不充分，樣品中其它成分殘留或酶殘留;防止辦法洗滌液應(yīng)注滿(mǎn)微孔，充分洗滌。
(3) 移液頭重復(fù)使用，未洗凈或消毒不*; 防止辦法移液頭一次性使用。
(4) 酶標(biāo)板靈敏度過(guò)高。
(5) 一抗顯色時(shí)間的控制等等，關(guān)于ELISA的每一步都要注意才行。
2、ELISA試劑盒加樣時(shí)的防錯(cuò)小經(jīng)驗(yàn)
(1)用一張寫(xiě)滿(mǎn)字的紙，字越多越好，比如報(bào)紙，墊在下面，這樣，加過(guò)標(biāo)本的小孔看過(guò)去下面的字會(huì)變小，沒(méi)加的字正常，非常容易區(qū)分。
(2)可以利用液面反光與沒(méi)有加的孔加以區(qū)別
(3)在標(biāo)本加完后，再把加樣槍全壓下，使液面產(chǎn)生小氣泡，也可以加以區(qū)分
3、棋盤(pán)ELISA試劑盒試驗(yàn)的操作方法:
(1)將抗原按一定的梯度倍比稀釋后，按照ELISA從上到下(或者從左到右)的順序包被。
(2)將抗體按一定的梯度倍比稀釋后按照ELISA從左到右或者從上到下加入。
(3)二抗的稀釋倍數(shù)是一定的，然后顯色，讀值。
OD值的測(cè)定時(shí)，波長(zhǎng)要根據(jù)顯色劑的不同而定，一般上大家都使用TMB顯色，450nm讀值。根據(jù)讀值得結(jié)果可以選定合適的抗原和抗體效價(jià)，這就是棋盤(pán) ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的目的，如果抗原包被量已知而二抗的工作濃度不確定的話(huà)就用一抗和二抗作棋盤(pán)試驗(yàn)。
上海通蔚生物科技有限公司
地址：上海市金山區(qū)楓涇鎮(zhèn)環(huán)東一路65弄2號(hào)3463室
主營(yíng)產(chǎn)品：ELISA檢測(cè)試劑盒，ELISA試劑盒，酶聯(lián)免疫試劑盒，人ELISA試劑盒，大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，豚鼠ELISA試劑盒，兔ELISA試劑盒，羊ELISA試劑盒，牛ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒，鴨ELISA試劑盒
©2019 版權(quán)所有：上海通蔚生物科技有限公司 備案號(hào)：滬ICP備14033764號(hào)-3 總訪問(wèn)量：1229145 站點(diǎn)地圖 技術(shù)支持：環(huán)保在線(xiàn) 管理登陸
